食品中那非類物質(zhì)的測定

BJS201601

1. 范圍

本方法規(guī)定了食品（含保健食品）中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達拉非、氨基他達拉非含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本方法適用于酒、咖啡、功能飲料、瑪咖片、保健食品中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達拉非、氨基他達拉非含量的測定。

1. 原理

試樣經(jīng)乙腈提取后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，外標法定量。

1. 試劑和材料

注：水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1乙腈（CH₃CN)：色譜純。

3.1.2甲酸（CH₂O₂）：質(zhì)譜級。

3.1.3 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1ml用水稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過濾后備用。

3.1.4 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1ml用乙腈稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過濾后備用。

3.2標準品

西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達拉非、氨基他達拉非標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見附錄A表A.1，純度≥98%。

3.3標準溶液配制

3.3.1標準儲備液：分別稱取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達拉非、氨基他達拉非標準品（3.2）0.1 g（至0.000 1 g），用乙腈溶解，并轉移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個月。

3.3.2混合標準系列工作液：分別準確吸取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達拉非、氨基他達拉非標準儲備液適量（3.3.1），用乙腈將其稀釋成含量分別為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的標準系列混合工作液。臨用時配制。

3.4微孔濾膜：0.22 µm，有機相。

1. 儀器和設備

4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。

4.2 超聲波清洗器。

4.3 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。

1. 分析步驟

5.1 試樣制備

準確稱取2g試樣（至0.01 g）于50 mL容量瓶中，加入40mL乙腈，超聲30 min，冷卻至室溫，用乙腈定容至刻度，搖勻，上清液經(jīng)微孔濾膜（3.4）過濾。取續(xù)濾液1.0mL于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

5.2 儀器參考條件

5.2.1 色譜條件

a）色譜柱： C18柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（內(nèi)徑），或性能相當者；

b）流動相：A為0.1%甲酸水溶液（3.1.3），B為0.1%甲酸乙腈溶液（3.1.4），洗脫梯度見表1；

c）流速：0.3 mL/min；

d）柱溫：35℃；

e）進樣量：2 μL。

表1 洗脫梯度

5.2.2 質(zhì)譜條件

a）電離方式：電噴霧正離子模式；

b）檢測方式：多反應檢測（MRM）；

c）霧化氣壓力：30psi；

d）離子噴霧電壓：3500V；

e）干燥氣溫度：330℃；

f）干燥氣流速：8 L/min；

g）定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見表2。

表2 那非類物質(zhì)的定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

* ：定量離子

5.3 定性測定

按照上述條件測定試樣和混合標準工作液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時間與混合標準工作液中的某種組分一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；試樣中定性離子對的相對豐度與濃度相當混合標準工作液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在該組分。

表3 定性確證時相對離子豐度的zui大允許偏差

5.4 定量測定

5.4.1 標準曲線的制作

將混合標準系列工作液（3.3.2）分別按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的標準溶液的色譜峰面積。以混合標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

5.4.2 試樣溶液的測定

將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次；試樣待測液響應值若低于標準曲線線性范圍，應取5.1中試樣提取續(xù)濾液進行分析；試樣待測液響應值若超出標準曲線線性范圍，應用乙腈稀釋后進行分析。

標準品液相色譜圖參見附錄B的圖B.1-B.11。

1. 結果計算

結果按式（1）計算：

…………………………………………（1）

式中：

X—試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c—由標準曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。

1. 精密度

在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的差值不得超過算術平均值的10%。

1. 其他

當稱樣量為2.00 g，定容體積為50mL時，西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達拉非檢出限為2μg/kg，硫代艾地那非、紅地那非、氨基他達拉非檢出限為5μg/kg，那紅地那非檢出限為8μg/kg。

附錄 A

那非類標準品信息

表A.1 那非類標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量

附錄 B

那非類標準品色譜圖

圖 B.1 西地那非色譜圖圖B.2豪莫西地那非色譜圖圖B.3羥基豪莫西地那非色譜圖

圖 B.4 那莫西地那非色譜圖圖 B.5 硫代艾地那非色譜圖圖 B.6 紅地那非色譜圖

圖 B.7 那紅地那非色譜圖圖 B.8 伐地那非色譜圖圖 B.9 偽伐地那非色譜圖

圖 B.10 他達拉非色譜圖圖 B.11 氨基他達拉非色譜圖