食品中維生素B₁₂的測(cè)定

維生素B₁₂標(biāo)準(zhǔn)品：

380-04112-S，Vitamin B12

維生素B₁₂同位素內(nèi)標(biāo)：

380-04412-IS，[13C7]-Vitamin B12

準(zhǔn)確稱取混合均勻的樣品2.0 g（精確至0.01g）于50 mL離心管中，加入20 mL去離子水溶液，渦旋10 min，

超聲15 min。于8000 r/min下離心10 min，移取4 mL上清液，待凈化。

SHIMSEN 維生素B₁₂免疫親和柱，1000ng/3mL（貨號(hào)：380-00930-03）

（1）活化：加壓排出免疫親和柱中的保護(hù)液，棄去流出液；

（2）上樣：準(zhǔn)確移取上清液4 mL加入免疫親和柱中，棄去流出液；

（3）清洗：當(dāng)上樣液的液面下降到免疫親和柱中的管體處時(shí)（未全流干時(shí)），向柱中加入10 mL水，棄去流出液，于負(fù)壓裝置（貨號(hào)：RT-26077）中將小柱抽干；

（4）洗脫：關(guān)閉負(fù)壓裝置閥門(mén)，向柱中加入2 mL甲醇，靜置2-3 min，打開(kāi)閥門(mén)，收集流出液。

（5）重新溶解：向洗脫液中加入50 µL 0.1%甲酸水，于50-60℃氮吹至近干；再加入1 mL 0.1%甲酸水渦旋混勻，過(guò)0.22 µm尼龍濾膜（貨號(hào)：380-00321），待檢測(cè)。

注意：

① 實(shí)驗(yàn)中應(yīng)控制柱流速不要超過(guò)1 mL/min；

② 免疫親和柱于2-8 ℃儲(chǔ)存，不可冷凍，使用前需要恢復(fù)到室溫。

食品中維生素B₁₂的測(cè)定 參考標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.285-2022 第二法